BRD9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404933-ACT

BRD9 codifica la proteina 9 contenente un bromodominio, un lettore epigenetico che riconosce i segni di acetil-lisina sugli istoni e contribuisce a coordinare l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. BRD9 agisce come subunità dei complessi di rimodellamento della cromatina SWI/SNF non canonici (ncBAF), collegando l’acetilazione degli istoni al posizionamento dei nucleosomi dipendente dall’ATP e alla regolazione degli enhancer. Attraverso queste attività, BRD9 contribuisce al controllo di programmi dello stato cellulare, inclusi proliferazione, differenziamento e trascrizione responsiva allo stress. Un rimodellamento della cromatina associato a BRD9 deregolato è stato implicato in molteplici contesti rilevanti per la malattia, in particolare nei tumori, dove circuiti trascrizionali alterati e dipendenze di linea cellulare sono temi di ricerca ricorrenti.

BRD9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BRD9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRD9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BRD9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BRD9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRD9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BRD9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRD9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRD9 nelle cellule tumorali con espressione di BRD9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.