BRAT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-415146-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRAT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BRAT1 Double Nickase Plasmid (h) e il BRAT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BRAT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRAT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-415146-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRAT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-415146-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAT1 (BRCA1-associated ATM activator 1) codifica una proteina nucleare coinvolta nella risposta al danno al DNA, in cui interagisce con la segnalazione ATM/ATR e con le vie associate a BRCA1 per sostenere la stabilità del genoma. BRAT1 è stato collegato alla regolazione del controllo dei checkpoint del ciclo cellulare e alla sopravvivenza cellulare dopo stress genotossico, in linea con ruoli nel coordinare eventi di fosforilazione a valle e l’attivazione dei percorsi di riparazione. L’alterazione o la disfunzione di BRAT1 è associata a fenotipi neurosviluppo e neurologici ed è stata studiata nel contesto di disturbi caratterizzati da riparazione del DNA compromessa e da risposte di stress mitocondriale o metabolico. Di conseguenza, BRAT1 è di interesse per studi meccanicistici sulla segnalazione dei checkpoint, lo stress replicativo e il mantenimento del genoma nelle cellule umane.
BRAT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BRAT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BRAT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BRAT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BRAT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.