BPTF Plasmide Double Nickase (h): sc-404092-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BPTF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BPTF Double Nickase Plasmid (h) e il BPTF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BPTF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BPTF Antibody (2343C3a): sc-81088
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BPTF Plasmide Double Nickase (h) | sc-404092-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPTF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404092-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BPTF (bromodomain PHD finger transcription factor) è una subunità centrale del complesso di rimodellamento della cromatina NURF, che collega il riconoscimento delle modificazioni istoniche allo scorrimento dei nucleosomi dipendente dall’ATP, contribuendo così a modellare l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. Attraverso il suo dominio PHD finger e il bromodominio, BPTF integra segnali derivanti dalla metilazione di H3K4 e dall’acetilazione degli istoni per regolare reti di espressione genica che controllano lo sviluppo, la specificazione di linea e la progressione del ciclo cellulare. Il rimodellamento dipendente da BPTF influenza l’attività degli enhancer e l’occupazione dei fattori di trascrizione, collegando lo stato epigenetico alla trascrizione mediata dalla RNA polimerasi II. Un’espressione o una funzione deregolata di BPTF è stata associata ad alterazioni degli stati della cromatina e a dipendenze trascrizionali osservate in molteplici contesti oncologici e neuroevolutivi, a supporto del suo impiego come bersaglio di ricerca in epigenetica e biologia della trascrizione.
BPTF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BPTF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BPTF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BPTF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BPTF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.