BPGM Plasmide Double Nickase (h): sc-405810-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BPGM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BPGM Double Nickase Plasmid (h) e il BPGM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BPGM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BPGM Antibody (C-4): sc-373819
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BPGM Plasmide Double Nickase (h) | sc-405810-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPGM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405810-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La bisfosfoglicerato mutasi (BPGM) è un enzima arricchito nella linea eritroide che regola lo shunt di Rapoport–Luebering sintetizzando e degradando il 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG), un fondamentale effettore allosterico dell’affinità dell’emoglobina per l’ossigeno. Controllando i livelli di 2,3-BPG, la BPGM collega il flusso glicolitico al rilascio di ossigeno e all’omeostasi metabolica dei globuli rossi, influenzando il bilancio energetico e i processi sensibili allo stato redox negli eritrociti maturi. Un’alterata attività della BPGM perturba l’abbondanza di 2,3-BPG e può modificare le dinamiche di dissociazione dell’ossigeno, rendendo la BPGM un bersaglio rilevante negli studi sulla fisiologia eritrocitaria e sull’adattamento all’ipossia. La disregolazione genetica o metabolica di questa via viene studiata nel contesto di patologie ereditarie dei globuli rossi e di fenotipi associati all’anemia, in cui risultano compromessi il trasporto di ossigeno e il rimodellamento della glicolisi.
BPGM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BPGM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BPGM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BPGM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BPGM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.