Bim_EL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400515-ACT

BCL2L11 codifica Bim, un membro pro‑apoptotico “BH3‑only” della famiglia BCL‑2 che collega i segnali di stress cellulare alla permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale e all’attivazione delle caspasi. L’isoforma Bim_EL è una delle principali forme regolate dalla fosforilazione e integra segnali provenienti dalle vie MAPK/ERK, JNK e PI3K/AKT per modulare apoptosi, anoikis e omeostasi delle cellule immunitarie. Antagonizzando le proteine anti‑apoptotiche della famiglia BCL‑2 e attivando BAX/BAK, Bim contribuisce a determinare il destino cellulare in condizioni di deprivazione di fattori di crescita, stress del reticolo endoplasmatico e perturbazioni del citoscheletro. Un’espressione o una regolazione del segnale di BCL2L11 alterate sono implicate nella sopravvivenza delle cellule tumorali, nei meccanismi di resistenza alle terapie e nella patobiologia immuno‑correlata, rendendolo un nodo chiave per la ricerca su apoptosi e risposta allo stress.

BimEL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCL2L11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BimEL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCL2L11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCL2L11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BimEL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCL2L11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BimEL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BimEL nelle cellule tumorali con espressione di BCL2L11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.