BICD2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405525

Panoramica

BICD2 (bicaudal D homolog 2) codifica un adattatore della dineina–dinactina che collega i carichi al trasporto verso l’estremità “minus” basato sui microtubuli, sostenendo il traffico a lunga distanza in cellule polarizzate come i neuroni. Collegando vescicole, endosomi e organelli alla dineina citoplasmatica, BICD2 contribuisce all’organizzazione del Golgi, al posizionamento degli endosomi, alla dinamica dell’involucro nucleare e a processi legati al ciclo cellulare, inclusa l’orientazione del fuso mitotico. Il trasporto dipendente da BICD2 si intreccia con vie che regolano l’omeostasi assonale e il traffico di membrana, in cui una consegna precisa dei carichi è necessaria per il mantenimento neuronale. La variabilità genetica in BICD2 è stata associata a fenotipi neuromuscolari, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della biologia dei motoneuroni e dei difetti del trasporto intracellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BICD2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BICD2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BICD2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BICD2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BICD2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BICD2 per lo studio della segnalazione di BICD2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BICD2 critici per la funzione di BICD2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BICD2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BICD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BICD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BICD2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BICD2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BICD2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BICD2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BICD2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.