BICD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410704-ACT

BICD1 (bicaudal D homolog 1) è una proteina adattatrice a coiled-coil che collega i motori citoplasmatici dyneina–dynactina al carico, coordinando il trasporto lungo i microtubuli diretto verso l’estremità meno. Contribuisce al posizionamento di vescicole e organelli, all’organizzazione dell’apparato di Golgi e al traffico associato al centrosoma, sostenendo processi quali la polarità cellulare e la progressione mitotica. Grazie al suo ruolo nelle reti di traffico intracellulare, BICD1 può influenzare la dinamica della segnalazione controllando il movimento e l’organizzazione spaziale di recettori ed endosomi. La disregolazione della funzione degli adattatori della dyneina è ampiamente rilevante per le risposte cellulari allo stress e per fenotipi osservati in contesti di ricerca sul neurosviluppo e sulle neurodegenerazioni.

BICD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BICD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BICD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BICD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BICD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BICD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BICD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BICD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BICD1 nelle cellule tumorali con espressione di BICD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.