beta Synuclein Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400894-ACT

Il gene umano **SNCB** codifica la **beta-sinucleina**, una proteina presinaptica e citosolica che modula la dinamica delle vescicole sinaptiche, il rilascio di neurotrasmettitori e il traffico di proteine associate alla membrana nei neuroni. In quanto membro della famiglia delle sinucleine, partecipa alle interazioni proteina–lipide e influenza i percorsi di proteostasi che regolano aggregazione, turnover e risposte allo stress a livello della sinapsi. Le alterazioni nella biologia delle sinucleine sono strettamente collegate a processi neurodegenerativi, e **SNCB** viene studiato per le sue interazioni con l’alfa-sinucleina, per gli effetti sulla resilienza sinaptica e per il contributo alla vulnerabilità neuronale. La ricerca utilizza comunemente **SNCB** per indagare i meccanismi della funzione sinaptica, della differenziazione neuronale e i pathway implicati nel morbo di Parkinson e nelle sinucleinopatie correlate.

beta Synuclein Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNCB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

beta Synuclein Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNCB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNCB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di beta Synuclein. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNCB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da beta Synuclein nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via beta Synuclein nelle cellule tumorali con espressione di SNCB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.