Bcr Plasmide Double Nickase (h): sc-401514-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Bcr Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Bcr Double Nickase Plasmid (h) e il Bcr Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BCR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Bcr Antibody (B-12): sc-28375
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Bcr Plasmide Double Nickase (h) | sc-401514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bcr Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCR codifica Bcr, una proteina multidominio con attività di chinasi serina/treonina e funzioni regolatorie sulle GTPasi della famiglia Rho, che coordina il rimodellamento del citoscheletro e la segnalazione intracellulare. Bcr agisce come proteina attivatrice della GTPasi (GAP) per RAC1 e altre piccole GTPasi correlate, collegando segnali a monte alla dinamica dell’actina, all’adesione e ai programmi di motilità cellulare. Contribuisce inoltre a reti di segnalazione che modulano proliferazione e risposte allo stress tramite interazioni con vie dipendenti dalla fosforilazione. Alterazioni della funzione di BCR sono biologicamente rilevanti in contesti di patologie ematologiche, in particolare attraverso eventi di fusione oncogenica che deregolano la segnalazione delle tirosin-chinasi e i conseguenti programmi trascrizionali a valle.
Bcr Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BCR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BCR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BCR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BCR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.