BAF155 Plasmide Double Nickase (h): sc-400838-NIC

SMARCC1 codifica BAF155, una subunità impalcatura centrale del complesso umano SWI/SNF (BAF) di rimodellamento della cromatina dipendente da ATP, che regola il posizionamento dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina. BAF155 contribuisce a programmi di controllo trascrizionale che governano l’impegno di linea, la progressione del ciclo cellulare e le risposte al danno al DNA attraverso interazioni coordinate con fattori di trascrizione e regolatori epigenetici. L’alterazione dell’integrità del complesso SWI/SNF rimodella i paesaggi di enhancer e promotori, influenzando vie come la segnalazione dello sviluppo e il mantenimento del genoma. Una funzione alterata di SMARCC1/BAF155 e lo squilibrio delle subunità SWI/SNF sono associati a stati di cromatina deregolati osservati in molteplici contesti di cancro e di malattie del neurosviluppo, rendendo SMARCC1 un nodo utile per studi meccanicistici sul rimodellamento della cromatina.

BAF155 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMARCC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMARCC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMARCC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMARCC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.