BACH1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-419283-LAC

BACH1 murino (BTB and CNC homology 1) è un repressore trascrizionale sensibile all’eme che eterodimerizza con le piccole proteine Maf per regolare programmi genici antiossidanti e citoprotettivi, inclusa la regolazione negativa di Hmox1. Integrando lo stato redox con l’output trascrizionale, BACH1 influenza le risposte allo stress ossidativo, l’omeostasi del ferro/dell’eme, il metabolismo mitocondriale e la segnalazione infiammatoria in molteplici tipi cellulari. Questo asse regolatorio è comunemente studiato in contesti in cui le specie reattive dell’ossigeno e la trascrizione adattativa allo stress modellano i fenotipi cellulari, inclusi modelli di infiammazione cronica, fibrosi, disfunzione metabolica e vie associate ai tumori.

Le particelle di attivazione lentivirale BACH1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Bach1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BACH1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Bach1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BACH1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Bach1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.