Plasmide Double Nickase (m) B7-2: sc-419575-NIC

Le gène murin **Cd86** code le récepteur co-stimulateur **B7-2 (CD86)**, une glycoprotéine membranaire de type I exprimée principalement par les cellules présentatrices d’antigène, telles que les cellules dendritiques, les macrophages et les lymphocytes B. En se liant à **CD28** et **CTLA-4** sur les lymphocytes T, B7-2 fait le lien entre la détection immunitaire innée et l’activation ainsi que la tolérance de l’immunité adaptative, en modulant la production d’IL-2, la prolifération des lymphocytes T et leur différenciation. L’expression de **Cd86** est induite par des signaux inflammatoires, notamment via la voie **TLR/NF-κB**, et contribue à l’amplitude et à la qualité des réponses antigène-dépendantes dans les tissus lymphoïdes. Une co-stimulation médiée par CD86 dérégulée est impliquée dans des mécanismes de maladies auto-immunes et inflammatoires, et fait l’objet de nombreuses études dans des modèles de rejet de greffe, d’allergie et d’interactions tumeur–système immunitaire.

B7-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cd86 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cd86. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cd86. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cd86.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.