AT_1a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419048

Panoramica

Agtr1a codifica il recettore murino dell’angiotensina II di tipo 1A (AT1a), un GPCR a sette domini transmembrana che media la segnalazione dell’angiotensina II in tessuti vascolari, renali, cardiaci e neurali. In seguito al legame con il ligando, AT1a si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, aumentare il Ca2+ intracellulare e stimolare vie di segnalazione dipendenti da PKC, coinvolgendo anche le cascate MAPK/ERK e le vie mediate da β-arrestina che influenzano programmi trascrizionali. Questo recettore integra gli input del sistema renina–angiotensina con processi cellulari che includono la regolazione del tono vasomotorio, la gestione di sodio e fluidi, le risposte allo stress ossidativo e la segnalazione infiammatoria. Un’attività deregolata della via di AT1a è ampiamente utilizzata come asse meccanicistico in modelli di ipertensione, ipertrofia e rimodellamento cardiaco, danno renale e disfunzione vascolare, rendendo Agtr1a un bersaglio comune per la dissezione delle vie di segnalazione in biologia cardiovascolare e renale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AT1a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Agtr1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Agtr1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Agtr1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AT1a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Agtr1a per lo studio della segnalazione di AT1a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Agtr1a critici per la funzione di AT1a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Agtr1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AT1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal AT1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Agtr1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AT1a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR AT1a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Agtr1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Agtr1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.