ATF-5 Plasmide Double Nickase (h): sc-416821-NIC

ATF5 codifica l’Activating Transcription Factor 5 (ATF-5), un fattore di trascrizione della famiglia basic leucine zipper che coordina programmi di espressione genica legati all’adattamento allo stress cellulare, alla sopravvivenza e al mantenimento della linea cellulare. L’attività di ATF-5 è spesso integrata con la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response) e della risposta integrata allo stress (integrated stress response), inclusa la regolazione trascrizionale dipendente dall’asse PERK–eIF2α–ATF4, e può influenzare l’omeostasi mitocondriale e reti trascrizionali correlate all’apoptosi. In molti sistemi cellulari, ATF-5 sostiene la proliferazione e la resistenza allo stress metabolico o proteotossico, rendendolo rilevante per studi sulla segnalazione oncogenica, sugli stati di differenziamento e sul rimodellamento trascrizionale indotto dallo stress. Un’espressione deregolata di ATF5 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e in modelli neurobiologici, a supporto dell’indagine sui suoi bersagli a valle e sulle dipendenze di via coinvolte in fenotipi associati alla malattia.

ATF-5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATF5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATF5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATF5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATF5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.