ASPP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423473-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASPP1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASPP1 Double Nickase Plasmid (m) e il ASPP1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ppp1r13b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASPP1 Antibody (LX011): sc-53903
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASPP1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423473-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Ppp1r13b** codifica la proteina stimolatrice dell’apoptosi di p53 1 (**ASPP1**), un regolatore nucleare che modula programmi trascrizionali coinvolti nel controllo dell’apoptosi, dei checkpoint del ciclo cellulare e delle risposte allo stress. ASPP1 interagisce con i membri della famiglia di p53 e influenza l’espressione di bersagli pro-apoptotici, collegandosi così alla segnalazione del danno al DNA e al controllo trascrizionale associato alla cromatina. Attraverso queste interazioni, ASPP1 contribuisce alle decisioni sul destino cellulare rilevanti per la soppressione tumorale, la stabilità genomica e l’omeostasi tissutale. Un’attività o un’espressione deregolata di ASPP1 è stata associata a soglie apoptotiche alterate e a fenotipi legati al cancro, sostenendo il suo studio nelle vie oncogeniche e nelle reti di risposta al danno.
ASPP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ppp1r13b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ppp1r13b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ppp1r13b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ppp1r13b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.