ASPP1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423473-ACT

マウスPpp1r13bはASPP1をコードしており、アポトーシス、細胞周期停止、DNA損傷応答を制御する配列特異的な転写プログラムを増強する、p53ファミリーの保存性の高い調節因子です。ASPP1は、p53、p63、p73の標的遺伝子選択に影響を与えることで、生存促進シグナルと細胞死促進シグナルのバランスを調節し、さらに上皮の恒常性維持や分化を形作るストレス応答性経路とも協調します。これらの機能を通じて、ASPP1活性の変化は、腫瘍抑制、ゲノム不安定性、そして状況依存的な細胞運命決定の再編成に関する実験モデルと関連します。そのためPpp1r13bは、細胞のストレス感知をプログラム細胞死へと結び付ける転写制御機構を解明するうえで有用なノードとなります。

ASPP1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ppp1r13bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASPP1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ppp1r13b 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPpp1r13b転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASPP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPpp1r13b遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASPP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPpp1r13b発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASPP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。