ARL3 Plasmide Double Nickase (h): sc-416856-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARL3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARL3 Double Nickase Plasmid (h) e il ARL3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARL3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARL3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-416856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARL3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARL3 codifica per la GTPasi 3 simile al fattore di ADP-ribosilazione (ADP-ribosylation factor-like), una piccola GTPasi regolatoria che passa ciclicamente tra gli stati legati a GDP e a GTP per coordinare il traffico nelle ciglia e nei fotorecettori. Nel ciglio primario, ARL3 agisce insieme ad ARL13B e all’attività GEF di ARL13B per controllare il rilascio e il corretto indirizzamento di carichi lipidati tramite trasportatori quali UNC119 e PDE6D, sostenendo il trasporto basato sui microtubuli e la composizione della membrana ciliare. Attraverso questi processi, ARL3 contribuisce alla ciliogenesi, alla trasduzione del segnale e alla compartimentalizzazione di proteine prenilate e miristoilate. La disregolazione del traffico dipendente da ARL3 è associata a fenotipi legati alle ciglia, inclusa la degenerazione retinica ereditaria e meccanismi più ampi correlati alle ciliopatie, rilevanti per la neurobiologia dello sviluppo e la biologia sensoriale.
ARL3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARL3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARL3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARL3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARL3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.