ARL13B Plasmide Double Nickase (h): sc-417325-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARL13B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARL13B Double Nickase Plasmid (h) e il ARL13B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARL13B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARL13B Antibody (C-5): sc-515784
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARL13B Plasmide Double Nickase (h) | sc-417325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARL13B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARL13B codifica una piccola GTPasi di tipo Arf-like arricchita nelle ciglia, che sostiene l’assemblaggio e la stabilità del ciglio primario e l’identità della membrana ciliare, coordinando così il traffico dei componenti di segnalazione all’interno del compartimento ciliare. ARL13B contribuisce all’organizzazione dell’architettura dell’assonema e regola vie dipendenti dalle ciglia, inclusa la segnalazione Sonic hedgehog, con effetti a valle sul patterning dello sviluppo e sui programmi di differenziazione cellulare. L’alterazione di ARL13B compromette la ciliogenesi e la trasduzione del segnale, collegando la disfunzione di ARL13B a fenotipi rilevanti per le ciliopatie e a disturbi del neurosviluppo come la sindrome di Joubert. In quanto GTPasi ciliare, ARL13B è ampiamente utilizzata come marcatore e nodo meccanicistico per studiare la biogenesi degli organelli, il traffico di membrana e la compartimentalizzazione delle vie di segnalazione nelle cellule umane.
ARL13B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARL13B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARL13B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARL13B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARL13B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.