ARHGAP29 Plasmide Double Nickase (h): sc-407394-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARHGAP29 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARHGAP29 Double Nickase Plasmid (h) e il ARHGAP29 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARHGAP29. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARHGAP29 Antibody (D-3): sc-365554
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARHGAP29 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407394-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP29 codifica una proteina attivatrice della GTPasi Rho che regola negativamente la segnalazione di RhoA accelerando l’idrolisi del GTP, modulando così il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare e la dinamica delle giunzioni. Attraverso il controllo della contrattilità dipendente da RhoA/ROCK, ARHGAP29 contribuisce alla morfogenesi epiteliale, alla migrazione cellulare e all’integrità dei tessuti. Studi genetici e funzionali collegano ARHGAP29 allo sviluppo craniofacciale, con varianti associate a labiopalatoschisi non sindromica e/o palatoschisi, e con una più ampia rilevanza per vie che governano l’adesione e la tensione del citoscheletro. La sua attività lo rende un bersaglio utile per analizzare i circuiti delle GTPasi della famiglia Rho e i fenotipi legati alla meccanotrasduzione in modelli cellulari umani.
ARHGAP29 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARHGAP29 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARHGAP29. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARHGAP29. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARHGAP29 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.