Arg Plasmide Double Nickase (h): sc-417779-NIC

ABL2 umano codifica la tirosin-chinasi non recettoriale Arg, una proteina di segnalazione citoplasmatica che integra segnali provenienti dai recettori per i fattori di crescita e dai complessi di adesione per regolare il rimodellamento del citoscheletro di actina, la formazione di protrusioni di membrana e la motilità cellulare. Arg fosforila molteplici proteine del citoscheletro e adattatrici, collegando la segnalazione mediata da chinasi a processi quali endocitosi, guida assonale e turnover delle adesioni focali. Attraverso i suoi domini SH3/SH2 e il dominio chinasico, Arg partecipa a vie a valle delle integrine e delle tirosin-chinasi recettoriali che influenzano migrazione, comportamenti legati all’invasione e risposte cellulari allo stress. Un’attività deregolata delle chinasi della famiglia ABL e un controllo citoscheletrico dipendente da Arg alterato sono stati associati, nella ricerca in biologia del cancro, a programmi di segnalazione oncogenica e a fenotipi anomali di movimento cellulare.

Arg Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABL2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.