apoF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407655-ACT

Il gene umano **APOF** codifica l’apolipoproteina F (apoF), un fattore circolante associato alle lipoproteine che modula il trasporto dei lipidi plasmatici e il rimodellamento delle lipoproteine. apoF è legata alla biologia delle particelle HDL e LDL e influenza le reazioni di scambio lipidico e la gestione delle lipoproteine mediata da recettori, che determinano la distribuzione del colesterolo nel circolo. Attraverso questi processi, **APOF** viene studiato nel contesto dell’omeostasi lipidica sistemica e dei meccanismi delle malattie cardiometaboliche, incluse le vie di rischio associate alla dislipidemia. La sua espressione e il suo impatto funzionale sono inoltre rilevanti nei modelli di metabolismo lipidico epatico, in cui produzione e clearance delle lipoproteine sono determinanti chiave dei profili lipidici.

apoF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APOF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

apoF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APOF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APOF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di apoF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APOF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da apoF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via apoF nelle cellule tumorali con espressione di APOF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.