apoA-II Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404987-ACT

L’APOA2 umano codifica l’apolipoproteina A-II (apoA-II), un importante componente strutturale delle lipoproteine ad alta densità (HDL) che modula la stabilità delle particelle lipoproteiche, il legame ai lipidi e lo scambio con enzimi plasmatici e proteine di trasferimento. apoA-II influenza l’omeostasi di colesterolo e trigliceridi plasmando il rimodellamento delle HDL e incidendo sulle interazioni con i pathway che regolano il metabolismo delle lipoproteine, inclusa l’attività della lecitina–colesterolo aciltransferasi e i processi di trasferimento lipidico. Alterazioni dell’espressione di APOA2 o dei livelli di apoA-II sono state associate a fenotipi legati alla dislipidemia e a tratti di rischio cardiometabolico, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici nella biologia dei lipidi. In contesti epatici e intestinali, apoA-II contribuisce al trasporto lipidico sistemico e può influenzare segnali infiammatori e metabolici collegati a processi associati all’aterosclerosi.

apoA-II Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APOA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

apoA-II Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APOA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APOA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di apoA-II. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APOA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da apoA-II nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via apoA-II nelle cellule tumorali con espressione di APOA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.