ANKRD9 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-428809-ACT

Il gene murino *Ankrd9* codifica ANKRD9, una proteina contenente ripetizioni di anchirina implicata in reti di interazione proteina-proteina che modellano la segnalazione intracellulare e la regolazione dello stato cellulare. Sebbene la funzione molecolare di ANKRD9 non sia ancora stata caratterizzata in modo completo, le proteine con ripetizioni di anchirina modulano comunemente attività di adattatori/scaffold, influenzando vie associate all’organizzazione del citoscheletro, al traffico vescicolare e alle risposte trascrizionali a segnali metabolici e di stress. L’espressione di *Ankrd9* è stata studiata in contesti rilevanti per l’omeostasi e la differenziazione tissutale, in cui cambiamenti nelle reti regolatorie possono contribuire a fenotipi associati a infiammazione, squilibri metabolici e programmi di crescita deregolati. Di conseguenza, *Ankrd9* rappresenta un nodo utile per indagare la connettività delle vie e il rimodellamento delle reti geniche in modelli cellulari murini e in vivo.

ANKRD9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ankrd9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ANKRD9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ankrd9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ankrd9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ANKRD9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ankrd9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ANKRD9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ANKRD9 nelle cellule tumorali con espressione di Ankrd9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.