AMPKβ2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403537

Panoramica

PRKAB2 codifica la subunità regolatoria β2 della protein chinasi attivata da AMP (AMP-activated protein kinase, AMPK), una chinasi serina/treonina eterotrimerica che rileva lo stato energetico cellulare attraverso il rapporto AMP/ADP rispetto all’ATP. AMPKβ2 contribuisce all’assemblaggio e alla localizzazione del complesso e collega l’attivazione a monte a cascate di fosforilazione che limitano i programmi anabolici, promuovendo al contempo vie cataboliche, tra cui l’assorbimento di glucosio, l’ossidazione degli acidi grassi e l’autofagia, tramite cross-talk con mTOR e reti correlate di sensing dei nutrienti. Grazie a queste funzioni, AMPKβ2 è rilevante per studi sull’adattamento allo stress metabolico, sull’omeostasi mitocondriale e sul controllo della crescita cellulare. Alterazioni della segnalazione AMPK sono state associate a disturbi metabolici e alla biologia del cancro, rendendo PRKAB2 un nodo utile per indagare la regolazione, dipendente dall’energia, dei percorsi di proliferazione e sopravvivenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AMPKβ2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRKAB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRKAB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRKAB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AMPKβ2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRKAB2 per lo studio della segnalazione di AMPKβ2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRKAB2 critici per la funzione di AMPKβ2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRKAB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AMPKβ2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRKAB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AMPKβ2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AMPKβ2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRKAB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRKAB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.