AMPK alpha 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400104-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AMPK alpha 1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AMPK alpha 1 Double Nickase Plasmid (h) e il AMPK alpha 1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRKAA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AMPK alpha 1 Antibody (H-4): sc-398861
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AMPK alpha 1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400104-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AMPK alpha 1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400104-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAA1 codifica la subunità catalitica α1 della protein chinasi attivata da AMP (AMPK), un sensore centrale dello stato energetico cellulare che viene attivato dall’aumento di AMP/ADP e da chinasi a monte come LKB1 e CAMKK2. AMPKα1 coordina l’adattamento metabolico regolando l’assorbimento di glucosio e la glicolisi, inibendo i programmi anabolici tramite la soppressione di mTORC1 e promuovendo l’autofagia e l’omeostasi mitocondriale attraverso la fosforilazione di effettori a valle. Attraverso queste attività, la segnalazione di AMPK modella le risposte allo stress da carenza di nutrienti, all’ipossia e allo stress ossidativo, influenzando la crescita cellulare, il metabolismo lipidico e la segnalazione infiammatoria. Un’attività deregolata di PRKAA1/AMPKα1 è stata associata a fenotipi di malattie metaboliche ed è frequentemente oggetto di studio in biologia del cancro, dove la riprogrammazione metabolica influisce su proliferazione e sopravvivenza.
AMPK alpha 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRKAA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRKAA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRKAA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRKAA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.