Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ALR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419093
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALR Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ALR, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ALR Antibody (E-7): sc-365885
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-419093 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Gfer** codifica l’**augmenter of liver regeneration (ALR)**, una ossidasi dei gruppi sulfidrilici dipendente da FAD che supporta l’importazione delle proteine mitocondriali e il ripiegamento ossidativo tramite la via **MIA40/CHCHD4** nello spazio intermembrana. Regolando la formazione dei ponti disolfuro e l’omeostasi redox, ALR contribuisce all’integrità mitocondriale, al metabolismo energetico cellulare e alla resistenza allo stress ossidativo. Alterazioni dell’attività di ALR sono state associate a disfunzione mitocondriale e a fenotipi epatocellulari e metabolici, con effetti a valle su apoptosi, infiammazione e omeostasi tissutale. Queste funzioni rendono **Gfer** un bersaglio rilevante per analizzare la segnalazione controllata dal redox e il controllo qualità dei mitocondri nelle cellule dei mammiferi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ALR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gfer in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gfer insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gfer a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ALR.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gfer per lo studio della segnalazione di ALR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Gfer critici per la funzione di ALR
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gfer per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ALR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ALR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gfer. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ALR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ALR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gfer per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gfer definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.