Aldolase C Plasmide Double Nickase (h): sc-400988-NIC

L’ALDOC umano codifica l’aldolasi C, un enzima glicolitico che catalizza la scissione reversibile del fruttosio-1,6-bisfosfato in triosi fosfato, collegando il metabolismo dei carboidrati alla produzione cellulare di ATP e ai flussi biosintetici. L’aldolasi C è particolarmente abbondante nel sistema nervoso centrale ed è spesso utilizzata come marcatore dello stato metabolico neuronale e gliale, con funzioni che si intrecciano con la glicolisi, l’omeostasi energetica e l’equilibrio redox. Alterazioni dell’espressione di ALDOC e la riprogrammazione metabolica sono state associate a disfunzioni neurologiche e sono state osservate anche in diversi contesti tumorali, in cui il rimodellamento delle vie glicolitiche sostiene la proliferazione e l’adattamento allo stress. In quanto nodo metabolico, ALDOC rappresenta un punto di accesso pratico per studiare la segnalazione dipendente dalla glicolisi, le risposte cellulari allo stress e la regolazione tessuto-specifica del metabolismo energetico.

Aldolase C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALDOC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALDOC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALDOC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALDOC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.