AlaRS Plasmide Double Nickase (h): sc-404252-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AlaRS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AlaRS Double Nickase Plasmid (h) e il AlaRS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AARS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AlaRS Antibody (A-6): sc-165990
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AlaRS Plasmide Double Nickase (h) | sc-404252-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AlaRS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404252-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AARS codifica la alanil‑tRNA sintetasi umana (AlaRS), una aminoacil‑tRNA sintetasi citosolica che lega l’alanina al proprio tRNA cognato, garantendo una decodifica accurata durante la traduzione. Mantenendo l’elevata fedeltà della carica dei tRNA, AlaRS sostiene la proteostasi globale e si collega alle risposte cellulari allo stress che sorvegliano il controllo qualità della traduzione. L’alterazione dell’attività delle aminoacil‑tRNA sintetasi può perturbare l’omeostasi della sintesi proteica ed è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e neurodegenerativi, rendendo AARS un nodo utile per studiare come le vie legate alla traduzione influenzino la fitness cellulare. La funzione di AARS è inoltre rilevante per indagini sulla biologia dei tRNA, sulla dinamica dei ribosomi e sui cambiamenti di segnalazione a valle innescati da un’aminoacilazione compromessa.
AlaRS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AARS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AARS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AARS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AARS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.