Akt2 Plasmide Double Nickase (m): sc-419072-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Akt2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Akt2 Double Nickase Plasmid (m) e il Akt2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Akt2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Akt2 Antibody (1G8C12): sc-81148
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Akt2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419072-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Akt2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419072-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Akt2 codifica la chinasi serina/treonina AKT2, un effettore centrale della segnalazione PI3K che collega gli input dei fattori di crescita e del recettore dell’insulina al controllo a valle dell’assorbimento del glucosio, della sintesi di glicogeno, del metabolismo lipidico e della sopravvivenza cellulare. Nei tessuti murini, l’attività di AKT2 influenza il traffico di membrana dei trasportatori del glucosio, i programmi anabolici regolati da mTORC1 e l’inibizione, dipendente dalla fosforilazione, di fattori pro-apoptotici come i fattori di trascrizione della famiglia FOXO. Una segnalazione di AKT2 deregolata è associata ad alterata sensibilità all’insulina e all’omeostasi metabolica, e l’attivazione aberrante della via è spesso studiata in modelli di proliferazione, risposte allo stress e segnalazione oncogenica. In quanto nodo che integra i segnali delle tirosin-chinasi recettoriali con i circuiti metabolici e del ciclo cellulare, Akt2 è ampiamente studiato in adipociti, epatociti, miociti e in diversi contesti di cellule tumorali.
Akt2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Akt2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Akt2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Akt2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Akt2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.