AGS3 Plasmide Double Nickase (m): sc-426766-NIC

Il gene murino Gpsm1 codifica l’attivatore della segnalazione delle proteine G 3 (AGS3), un regolatore multidominio che si lega alle subunità Gαi/o cariche di GDP tramite i suoi motivi GoLoco e modula il ciclo delle proteine G eterotrimeriche indipendentemente dall’attivazione canonica dei GPCR. AGS3 influenza la segnalazione dei secondi messaggeri e il traffico recettoriale, modellando le vie a valle che controllano la polarità cellulare, la dinamica delle vescicole e l’organizzazione del citoscheletro. Nel sistema nervoso, AGS3 è associato alla plasticità sinaptica e a risposte adattative a stimoli neuromodulatori, mentre in altri tessuti contribuisce a un controllo dipendente dal contesto dei comportamenti proliferativi e migratori. Reti di segnalazione delle proteine G deregolate che coinvolgono AGS3 sono studiate in relazione a fenotipi neurocomportamentali e al rimodellamento della segnalazione associato alla biologia tumorale, rendendo Gpsm1 un bersaglio utile per interrogare in modo meccanicistico le vie di segnalazione.

AGS3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gpsm1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gpsm1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gpsm1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gpsm1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.