AFG3L2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404565-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AFG3L2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AFG3L2 Double Nickase Plasmid (h) e il AFG3L2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AFG3L2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AFG3L2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404565-NIC | 20 µg | $410.00 |
AFG3L2 codifica una metalloproteasi mitocondriale AAA+ della membrana interna che forma il complesso proteasico m-AAA, garantendo un controllo qualità delle proteine dipendente dall’ATP sul versante della membrana interna rivolto verso lo spazio intermembrana. Regolando il turnover e la maturazione dei componenti della catena respiratoria e di substrati legati ai ribosomi mitocondriali, AFG3L2 contribuisce all’efficienza della fosforilazione ossidativa, alla proteostasi mitocondriale e alla segnalazione adattativa allo stress. La perdita o la disfunzione di AFG3L2 altera la dinamica mitocondriale e la bioenergetica, favorendo l’accumulo di proteine mal ripiegate e un’omeostasi dell’organello compromessa. Le varianti in AFG3L2 sono associate a fenotipi neurodegenerativi, collegando l’attività delle proteasi mitocondriali alla vulnerabilità neuronale e al mantenimento degli assoni.
AFG3L2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AFG3L2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AFG3L2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AFG3L2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AFG3L2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.