Acrosin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402292

Übersicht

ACR kodiert Akrosin, eine Serinprotease, die als Zymogen Proakrosin synthetisiert und im Akrosom humaner Spermatozoen gespeichert wird. Im Zuge der Kapazitation und der Akrosomreaktion ist Akrosin an einer regulierten Proteolyse und Substratbindung beteiligt, die die Interaktion der Spermien mit der Zona pellucida sowie das Vordringen durch extrazelluläre Matrizes während der Befruchtung unterstützen. Seine Aktivität steht in Zusammenhang mit der akrosomalen Exozytose, Protease-Aktivierungskaskaden und dem Umbau von Spermienoberflächenproteinen bei der Gametenerkennung. Eine veränderte ACR-Expression oder Akrosin-Funktion wird im Kontext der männlichen Reproduktionsbiologie und infertilitätsassoziierter Phänotypen untersucht, einschließlich beeinträchtigter Spermien–Zona-Bindung und verminderter Befruchtungskompetenz.

Das Acrosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Acrosin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Acrosin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACR-Exone abzielen, die für die Acrosin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Acrosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Acrosin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Acrosin HDR-Plasmid (h) und Acrosin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.