ACOT8 Plasmide Double Nickase (h): sc-407262-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ACOT8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ACOT8 Double Nickase Plasmid (h) e il ACOT8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ACOT8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ACOT8 Antibody (C-3): sc-7343
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ACOT8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACOT8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACOT8 codifica l’acil-CoA tioesterasi 8, un enzima perossisomiale che idrolizza i tioesteri degli acil-CoA a acidi grassi liberi e coenzima A, contribuendo a regolare la disponibilità di CoA all’interno del perossisoma e la dimensione del pool di acil-CoA. Modulando il flusso di substrati attraverso la β-ossidazione perossisomiale e il rimodellamento lipidico, ACOT8 contribuisce all’omeostasi lipidica cellulare e all’equilibrio redox. La sua attività si integra con processi più ampi associati ai perossisomi, inclusa la gestione degli acidi grassi a catena molto lunga e il coordinamento con l’ossidazione degli acidi grassi nei mitocondri. La disregolazione delle vie del metabolismo lipidico perossisomiale che coinvolgono ACOT8 è stata studiata nel contesto di fenotipi metabolici e infiammatori in cui sono rilevanti alterazioni dell’utilizzo degli acidi grassi e dello stress ossidativo.
ACOT8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACOT8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACOT8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACOT8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACOT8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.