ACBD5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417183

Panoramica

ACBD5 codifica una proteina perossisomiale contenente un dominio di legame per l’acil-CoA, che supporta la gestione intracellulare dei lipidi legando esteri di acil-CoA a catena lunga e coordinando il metabolismo lipidico associato ai perossisomi. Si localizza alla membrana del perossisoma e contribuisce alla comunicazione tra perossisomi e altri organelli, influenzando il traffico degli acidi grassi e l’organizzazione delle vie perossisomiali coinvolte nell’omeostasi lipidica. Attraverso il suo ruolo nella dinamica perossisomiale e nella lavorazione dei lipidi, ACBD5 è rilevante per le risposte allo stress cellulare collegate ad alterazioni della composizione lipidica e a disfunzioni degli organelli. La disregolazione del metabolismo lipidico dipendente dai perossisomi è spesso studiata nel contesto di neurodegenerazione, squilibrio metabolico e segnalazione infiammatoria, rendendo ACBD5 un bersaglio utile per indagini meccanicistiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBD5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACBD5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACBD5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACBD5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACBD5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACBD5 per lo studio della segnalazione di ACBD5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACBD5 critici per la funzione di ACBD5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACBD5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACBD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ACBD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACBD5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACBD5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ACBD5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACBD5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACBD5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.