ACAD-9 Double Nickase Plasmid (m): sc-432841-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACAD-9 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACAD-9 Double-Nickase-Plasmid (m) und ACAD-9 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Acad9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACAD-9 Double Nickase Plasmid (m) | sc-432841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACAD-9 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Acad9 kodiert ACAD-9, ein mitochondriales Flavoprotein, das als Acyl-CoA-Dehydrogenase in der β-Oxidation von Fettsäuren wirkt und zudem die oxidative Phosphorylierung unterstützt, indem es an der Assemblierung und Stabilität von Komplex I (NADH:Ubiquinon-Oxidoreduktase) beteiligt ist. Durch die Kopplung des aus Lipiden stammenden Elektronenflusses an die Funktion der Atmungskette trägt ACAD-9 zum mitochondrialen Redoxgleichgewicht, zur ATP-Produktion und zur metabolischen Anpassung in energiebedürftigen Geweben bei. Eine Störung der ACAD-9-Aktivität ist mit beeinträchtigter mitochondrialer Atmung, veränderten Acylcarnitin-Profilen und zellulärem bioenergetischem Stress assoziiert, was Acad9 zu einem relevanten Ziel für Studien zu Mechanismen mitochondrialer Erkrankungen macht. In Mausmodellen und Zellsystemen ermöglicht eine Perturbation von Acad9 die Untersuchung metabolischer Umprogrammierung, des Umgangs mit ROS sowie mito-nukleärer Signalwege unter Bedingungen der Fettsäurenutzung und einer eingeschränkten Funktion der Atmungskette.
ACAD-9 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Acad9-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Acad9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Acad9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Acad9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.