ABHD6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405114-ACT

Il gene umano **ABHD6** codifica la proteina 6 contenente il dominio α/β-idrolasi, un’idrolasi della serina che funziona come lipasi dei monoacilgliceroli e contribuisce al metabolismo degli endocannabinoidi e dei glicerolipidi. Idrolizzando il 2-arachidonoilglicerolo e lipidi correlati, ABHD6 contribuisce a modulare la segnalazione dei recettori cannabinoidi, la disponibilità di secondi messaggeri lipidici e il rimodellamento dei lipidi di membrana. La sua attività si intreccia con programmi metabolici e infiammatori, influenzando l’omeostasi energetica cellulare e vie di segnalazione sensibili allo stress. Un’espressione o un’attività di ABHD6 deregolate sono state associate ad alterazioni della gestione dei lipidi in contesti cardiometabolici e neuroinfiammatori, a sostegno della sua rilevanza negli studi meccanicistici delle malattie metaboliche e della biologia del sistema nervoso.

ABHD6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ABHD6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ABHD6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ABHD6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ABHD6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ABHD6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ABHD6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ABHD6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ABHD6 nelle cellule tumorali con espressione di ABHD6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.