A-Raf Plasmide Double Nickase (h): sc-401799-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- A-Raf Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il A-Raf Double Nickase Plasmid (h) e il A-Raf Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARAF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: A-Raf Antibody (A-5): sc-166771
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
A-Raf Plasmide Double Nickase (h) | sc-401799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
A-Raf Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARAF codifica la chinasi serina/treonina A‑Raf, un membro della famiglia RAF che collega RAS attivato alla cascata di segnalazione MAPK/ERK. Attraverso un’attivazione regolata e la dimerizzazione, A‑Raf contribuisce alla fosforilazione di MEK e al controllo a valle dei programmi di proliferazione, differenziazione e sopravvivenza cellulare. L’attività di ARAF si interseca con la segnalazione dei recettori per i fattori di crescita e può influenzare la regolazione tramite feedback all’interno della via ERK e il cross-talk con la segnalazione PI3K–AKT. La disregolazione della segnalazione RAF–MEK–ERK, inclusa un’alterata utilizzazione delle isoforme RAF, è ampiamente rilevante nelle reti di segnalazione oncogeniche e nella modellizzazione di dipendenze di via contestuali nelle cellule umane.
A-Raf Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARAF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARAF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARAF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARAF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.