A-FABP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400756-ACT

Il FABP4 umano codifica la proteina adipocitaria legante gli acidi grassi (A-FABP), uno chaperone lipidico citosolico che lega acidi grassi a lunga catena e ne coordina il traffico verso vie metaboliche e di segnalazione. A-FABP integra la gestione dei lipidi con i programmi di differenziamento degli adipociti e collega il flusso degli acidi grassi alla regolazione trascrizionale, inclusa l’interazione con reti dipendenti da PPAR. In contesti immunitari e stromali, l’espressione di FABP4 è associata alla segnalazione infiammatoria e a risposte guidate dai lipidi che influenzano l’omeostasi tissutale. L’attività deregolata di FABP4 è stata ampiamente studiata nella disfunzione metabolica associata all’obesità, nella resistenza all’insulina, nell’aterosclerosi e nella biologia del microambiente tumorale, come nodo meccanicistico che connette metabolismo lipidico e infiammazione.

A-FABP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FABP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

A-FABP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FABP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FABP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di A-FABP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FABP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da A-FABP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via A-FABP nelle cellule tumorali con espressione di FABP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.