52 kDa Ro/SSA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400885-ACT

TRIM21 codifica la proteina Ro/SSA da 52 kDa, una ligasi E3 dell’ubiquitina che funziona come recettore Fc citosolico, collegando i bersagli legati ad anticorpi alla degradazione proteasomiale dipendente dall’ubiquitina. Modula la segnalazione dell’immunità innata e i programmi genici infiammatori regolando intermedi chiave in vie quali l’interferone di tipo I e NF-κB, contribuendo così a plasmare le risposte antivirali e allo stress. TRIM21 partecipa anche al controllo qualità delle proteine e al turnover dei complessi di segnalazione, mettendo in relazione l’ubiquitinazione con gli output trascrizionali. La disregolazione del riconoscimento immunitario associato a Ro/SSA e della segnalazione controllata da TRIM21 è stata implicata in fenotipi autoimmuni associati ad autoanticorpi, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla tolleranza immunitaria e sull’infiammazione.

52 kDa Ro/SSA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRIM21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

52 kDa Ro/SSA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRIM21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRIM21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di 52 kDa Ro/SSA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRIM21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da 52 kDa Ro/SSA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via 52 kDa Ro/SSA nelle cellule tumorali con espressione di TRIM21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.