52 kDa Ro/SSA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400885-ACT

TRIM21 kodiert das 52‑kDa‑Ro/SSA‑Protein, eine E3‑Ubiquitin-Ligase, die als zytosolischer Fc‑Rezeptor fungiert und antikörpergebundene Zielstrukturen mit der ubiquitinabhängigen proteasomalen Degradation koppelt. Es moduliert Signalwege der angeborenen Immunität und inflammatorische Genprogramme, indem es zentrale Zwischenkomponenten in Pfaden wie Typ‑I‑Interferon und NF‑κB reguliert und so antivirale sowie Stressantworten prägt. TRIM21 ist außerdem an der Proteinhomöostase beteiligt und steuert den Abbau von Signalkomplexen, wodurch Ubiquitinierung mit transkriptionellen Outputs verknüpft wird. Eine Fehlregulation der Ro/SSA-assoziierten Immunerkennung und der von TRIM21 kontrollierten Signalübertragung wurde mit autoantikörperassoziierten autoimmunen Phänotypen in Verbindung gebracht und ist daher relevant für mechanistische Studien zu Immuntoleranz und Entzündung.

52 kDa Ro/SSA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRIM21-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

52 kDa Ro/SSA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRIM21-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRIM21-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen 52 kDa Ro/SSA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRIM21-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von 52 kDa Ro/SSA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des 52 kDa Ro/SSA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRIM21-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.