5-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401239

Übersicht

ALOX5 kodiert die 5‑Lipoxygenase (5‑LO), eine nicht-hämhaltige Eisen-Dioxygenase, die die ersten festgelegten Schritte im Stoffwechsel der Arachidonsäure zu Leukotrien A4 katalysiert, das anschließend in bioaktive Leukotriene umgewandelt wird. Die 5‑LO‑Aktivität wird durch zelluläre Calciumflüsse, die Membranassoziation mit FLAP (ALOX5AP), phosphorylierungsabhängige Signalwege und den Redoxstatus reguliert und ist damit mit der Aktivierung der angeborenen Immunabwehr sowie Netzwerken entzündlicher Lipidmediatoren verknüpft. Die Leukotriensignalgebung über CysLT‑ und BLT‑Rezeptoren beeinflusst die Chemotaxis von Leukozyten, die Gefäßpermeabilität und die Zytokinfreisetzung und verortet ALOX5 in Signalwegen, die für Asthma und allergische Entzündung, Atherosklerose und tumorassoziierte Entzündung relevant sind. Eine Fehlregulation der ALOX5‑Expression oder des Flusses durch diesen Signalweg wird zudem als mechanistischer Readout in Studien zu oxidativem Stress, Makrophagenpolarisierung und dem Eicosanoid‑Crosstalk mit aus Cyclooxygenasen stammenden Prostanoiden genutzt.

Das 5-LO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALOX5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALOX5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALOX5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die 5-LO-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALOX5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der 5-LO-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALOX5-Exone abzielen, die für die 5-LO-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALOX5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom 5-LO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom 5-LO CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALOX5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das 5-LO HDR-Plasmid (h) und 5-LO HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALOX5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALOX5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.