5-LO Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401239

Panoramica

ALOX5 codifica la 5-lipossigenasi (5-LO), una diossigenasi ferro-dipendente non eme che catalizza i primi passaggi irreversibili del metabolismo dell’acido arachidonico verso il leucotriene A4, successivamente convertito in leucotrieni bioattivi. L’attività della 5-LO è regolata dai flussi di calcio intracellulari, dall’associazione alla membrana con FLAP (ALOX5AP), da segnali dipendenti dalla fosforilazione e dallo stato redox, collegandola all’attivazione dell’immunità innata e alle reti di mediatori lipidici infiammatori. La segnalazione dei leucotrieni tramite i recettori CysLT e BLT modula la chemiotassi dei leucociti, la permeabilità vascolare e il rilascio di citochine, collocando ALOX5 in vie rilevanti per l’asma e l’infiammazione allergica, l’aterosclerosi e l’infiammazione associata ai tumori. Un’espressione o un flusso di via di ALOX5 deregolati vengono inoltre usati come indicatore meccanicistico in studi su stress ossidativo, polarizzazione dei macrofagi e crosstalk degli eicosanoidi con i prostanoidi derivati dalla cicloossigenasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO 5-LO (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ALOX5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ALOX5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ALOX5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina 5-LO.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ALOX5 per lo studio della segnalazione di 5-LO, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ALOX5 critici per la funzione di 5-LO
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ALOX5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal 5-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal 5-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ALOX5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal 5-LO Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR 5-LO (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ALOX5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ALOX5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.