Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
3PGDH Double Nickase Plasmid (m): sc-433506-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 3PGDH Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 3PGDH Double-Nickase-Plasmid (m) und 3PGDH Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Phgdh abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 3PGDH: sc-390610
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
3PGDH Double Nickase Plasmid (m) | sc-433506-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
3PGDH Double Nickase Plasmid (m2) | sc-433506-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Phgdh* kodiert die 3‑Phosphoglycerat-Dehydrogenase (3PGDH), das erste und geschwindigkeitsbestimmende Enzym des phosphorylierten L‑Serin-Biosynthesewegs, der das glykolytische Zwischenprodukt 3‑Phosphoglycerat in Richtung Serin- und Glycinproduktion umleitet. Über die Kontrolle der Serinverfügbarkeit beeinflusst 3PGDH den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel, die Nukleotidsynthese, die Redox-Homöostase sowie lipogene Biosyntheseprogramme, die Proliferation und Differenzierung unterstützen. Die Phgdh-Aktivität ist daher eng mit metabolischer Reprogrammierung und zellulären Stressantworten in Geweben mit hohem biosynthetischem Bedarf verknüpft, darunter das Nervensystem. Eine veränderte PHGDH/3PGDH-Funktion wurde sowohl mit angeborenen Störungen des Serinstoffwechsels als auch mit metabolischen Abhängigkeiten in einigen proliferativen Zuständen in Verbindung gebracht, was *Phgdh* zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung krankheitsrelevanter metabolischer Schaltkreise macht.
3PGDH Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Phgdh-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Phgdh abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Phgdh-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Phgdh-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.