11β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401400-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 11β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 11β-HSD2 Double Nickase Plasmid (h) e il 11β-HSD2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HSD11B2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 11β-HSD2 Antibody (C-9): sc-365529
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
11β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401400-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
11β-HSD2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401400-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD11B2 codifica la 11β-idrossisteroide deidrogenasi umana di tipo 2 (11β-HSD2), un’ossidoreduttasi NAD+-dipendente che inattiva il cortisolo convertendolo in cortisone e, in questo modo, protegge la segnalazione del recettore dei mineralcorticoidi dall’eccesso di glucocorticoidi. Questo enzima è un determinante chiave del metabolismo pre-recettoriale degli ormoni steroidei e contribuisce all’omeostasi elettrolitica negli epiteli responsivi ai mineralcorticoidi, inclusi rene e colon. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di HSD11B2 sono associate a una deregolazione della segnalazione dei corticosteroidi e a fenotipi compatibili con un apparente eccesso di mineralcorticoidi, rendendolo rilevante per studi sulla biologia dell’ipertensione e sulla regolazione endocrina. La 11β-HSD2 è inoltre studiata nella placenta e nei tessuti vascolari per il suo ruolo nel modulare l’esposizione locale ai glucocorticoidi e i conseguenti programmi trascrizionali a valle.
11β-HSD2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HSD11B2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HSD11B2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HSD11B2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HSD11B2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.