Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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β3 Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400525-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β3 Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β3 Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und β3 Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBB3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β3 Tubulin: sc-80005
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β3 Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400525-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β3 Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400525-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB3 kodiert das humane β3‑Tubulin, eine in Neuronen angereicherte β‑Tubulin‑Isoform, die mit α‑Tubulin zu Mikrotubuli polymerisiert und damit die Dynamik der mitotischen Spindel, das axonale Wachstum, den intrazellulären Transport und den Umbau des Zytoskeletts unterstützt. β3‑Tubulin ist an mikrotubuliabhängigen Prozessen beteiligt, die Zellpolarität und Migration prägen, und beeinflusst über Interaktionen mit Motorproteinen den Vesikeltransport. Veränderte TUBB3‑Expression oder eine geänderte Zusammensetzung der Tubulin‑Isoformen wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit der Krebsbiologie in Verbindung gebracht, wo die Regulation des Mikrotubuli‑Netzwerks mit Signalwegen zu Proliferation, Invasion und Medikamentenansprechen zusammenläuft. Als Marker der neuronalen Differenzierung und des zytoskelettalen Zustands wird TUBB3 häufig in Modellen der neuronalen Linienfestlegung und der Plastizität von Tumorzellen untersucht.
β3 Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBB3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBB3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBB3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBB3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.