β3 Tubulin Plasmide Double Nickase (h): sc-400525-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β3 Tubulin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β3 Tubulin Double Nickase Plasmid (h) e il β3 Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TUBB3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: β3 Tubulin Antibody (2G10): sc-80005
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β3 Tubulin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400525-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β3 Tubulin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400525-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBB3 codifica la β3-tubulina umana, un’isotipo di β-tubulina arricchito nei neuroni che polimerizza con l’α-tubulina per formare i microtubuli, sostenendo la dinamica del fuso mitotico, la crescita assonale, il trasporto intracellulare e il rimodellamento del citoscheletro. La β3-tubulina partecipa a processi dipendenti dai microtubuli che modellano la polarità e la migrazione cellulare e influenza il traffico vescicolare tramite interazioni con le proteine motrici. Un’alterata espressione di TUBB3 o una diversa composizione degli isotipi di tubulina è stata collegata a fenotipi di neurosviluppo e alla biologia dei tumori, in cui la regolazione della rete dei microtubuli si intreccia con vie di proliferazione, invasione e risposta ai farmaci. In quanto marcatore di differenziamento neuronale e dello stato del citoscheletro, TUBB3 è ampiamente studiato in modelli di impegno di linea neurale e di plasticità delle cellule tumorali.
β3 Tubulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TUBB3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TUBB3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TUBB3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TUBB3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.