β1-Adaptin Plasmide Double Nickase (h): sc-402948-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β1-Adaptin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h) e il β1-Adaptin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AP1B1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β1-Adaptin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402948-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β1-Adaptin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402948-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP1B1 codifica la subunità umana β1-adattina del complesso adaptor protein 1 (AP-1), un adattatore di rivestimento fondamentale che collega le proteine cargo alla clatrina durante la gemmazione delle vescicole nel trans-Golgi network e negli endosomi. Riconoscendo motivi di smistamento nelle code citosoliche, AP-1 coordina il traffico polarizzato, il riciclo dei recettori e la consegna regolata di proteine di membrana che modellano la segnalazione cellulare e l’omeostasi. Il trasporto dipendente dalla β1-adattina si interfaccia con lo smistamento endosomiale, la biogenesi dei lisosomi e le vie di turnover delle proteine di membrana, che influenzano la polarità epiteliale e la funzione neuronale. L’alterazione di AP1B1 è stata associata a disordini ereditari del traffico intracellulare, inclusi fenotipi neuroevolutivi e caratteristiche di malattia multisistemica legate a un difetto nello smistamento dei cargo.
β1-Adaptin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AP1B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AP1B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AP1B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AP1B1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.