α_1D-AR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419022

Panoramica

Adra1d codifica il recettore adrenergico α1D del topo (α1D-AR), un recettore accoppiato a proteine G che si associa principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la produzione di inositol fosfati, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e l’attivazione della PKC. Attraverso queste vie, α1D-AR influenza la contrazione della muscolatura liscia, il tono vascolare e delle vie urinarie e una più ampia regolazione del sistema autonomo, con effetti a valle sulla segnalazione MAPK/ERK e su programmi trascrizionali. L’espressione di Adra1d e le dinamiche della sua segnalazione vengono spesso studiate nel contesto della responsività adrenergica specifica dei tessuti e del contributo dei diversi sottotipi recettoriali all’omeostasi fisiologica. Una segnalazione GPCR adrenergica deregolata è stata associata a fenotipi cardiometabolici e neurocomportamentali in modelli preclinici, rendendo Adra1d un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulle vie sensibili allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α1D-AR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adra1d in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adra1d insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adra1d a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α1D-AR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adra1d per lo studio della segnalazione di α1D-AR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adra1d critici per la funzione di α1D-AR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adra1d per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α1D-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α1D-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adra1d. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α1D-AR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α1D-AR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adra1d per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adra1d definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.