α Enolase Plasmide Double Nickase (h): sc-400633-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α Enolase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α Enolase Double Nickase Plasmid (h) e il α Enolase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ENO1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: α Enolase Antibody (9): sc-101513
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α Enolase Plasmide Double Nickase (h) | sc-400633-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α Enolase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400633-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ENO1 codifica l’α-enolasi umana, un enzima bifunzionale che catalizza il passaggio da 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato nella glicolisi e contribuisce in modo ampio al metabolismo energetico cellulare. Oltre al suo ruolo metabolico, l’α-enolasi è stata implicata nel legame al plasminogeno sulla superficie cellulare e in programmi di segnalazione responsivi allo stress che influenzano proliferazione, migrazione e sopravvivenza. L’attività di ENO1 si intreccia con la riprogrammazione glicolitica, le vie di adattamento all’ipossia e altri processi metabolici frequentemente studiati in biologia del cancro e in contesti infiammatori. Un’espressione o una localizzazione deregolate di ENO1 sono associate a fenotipi metabolici alterati e sono state investigate in ambiti che includono progressione tumorale, autoimmunità e modelli di malattie neurodegenerative.
α Enolase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ENO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ENO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ENO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ENO1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.