αA-crystallin Plasmide Double Nickase (h): sc-402047-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- αA-crystallin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il αA-crystallin Double Nickase Plasmid (h) e il αA-crystallin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRYAA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: αA-crystallin Antibody (B-2): sc-28306
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
αA-crystallin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
αA-crystallin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYAA codifica per la αA-cristallina umana, una piccola proteina da shock termico che agisce come chaperone molecolare indipendente dall’ATP, stabilizzando proteine parzialmente non ripiegate e limitandone l’aggregazione in condizioni di stress. Nel cristallino oculare, la αA-cristallina sostiene la proteostasi e contribuisce alla trasparenza del cristallino tamponando i danni indotti da ossidazione, calore e raggi UV, oltre a modulare l’organizzazione del citoscheletro e la segnalazione apoptotica in diversi tipi cellulari. La proteina partecipa a reti di risposta allo stress legate alla gestione delle proteine non correttamente ripiegate e al mantenimento di complessi proteici a lunga durata. La disregolazione o le mutazioni di CRYAA sono associate alla catarattogenesi e sono state studiate nel contesto di risposte allo stress proteotossico rilevanti per fenotipi neurodegenerativi e miopatici.
αA-crystallin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRYAA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRYAA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRYAA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRYAA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.