α3e Tubulin Plasmide Double Nickase (h): sc-400023-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α3e Tubulin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α3e Tubulin Double Nickase Plasmid (h) e il α3e Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TUBA3E. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α3e Tubulin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400023-NIC | 20 µg | $410.00 |
TUBA3E codifica la tubulina α3e, una subunità dei microtubuli che si lega alla β-tubulina e che sostiene l’architettura del citoscheletro, il trasporto intracellulare e l’organizzazione del fuso mitotico. In quanto componente centrale del polimero di tubulina, la tubulina α3e contribuisce alla dinamica dei microtubuli alla base della progressione del ciclo cellulare, della crescita dei prolungamenti neuronali e del traffico polarizzato. Alterazioni nell’espressione degli isotipi di tubulina o nella stabilità dei microtubuli possono modificare la segregazione cromosomica e la motilità cellulare, processi spesso implicati nell’instabilità genomica e nella biologia tumorale. TUBA3E è quindi studiato in vie correlate al rimodellamento del citoscheletro, alla mitosi e alle risposte allo stress indotte da composti che colpiscono i microtubuli.
α3e Tubulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TUBA3E nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TUBA3E. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TUBA3E. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TUBA3E interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.