α3d Tubulin Plasmide Double Nickase (h): sc-400024-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- α3d Tubulin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il α3d Tubulin Double Nickase Plasmid (h) e il α3d Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TUBA3D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
α3d Tubulin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α3d Tubulin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA3D codifica la tubulina α3d, una subunità strutturale dei microtubuli che si associa alla β-tubulina e sostiene l’organizzazione del citoscheletro, il trasporto intracellulare e l’assemblaggio del fuso mitotico. Come parte del pool di eterodimeri di tubulina, la tubulina α3d contribuisce all’instabilità dinamica dei microtubuli, alla base della divisione cellulare, della polarità e del traffico vescicolare, interfacciandosi con vie regolate da proteine associate ai microtubuli e da complessi motori quali chinesine e dineina. Alterazioni nell’espressione delle isoforme di tubulina e nella regolazione dei microtubuli sono ampiamente rilevanti per aneuploidia, instabilità cromosomica e modifiche della motilità cellulare, processi spesso studiati in oncologia e in ambito neuroevolutivo. TUBA3D rappresenta quindi un bersaglio utile per analizzare fenotipi dipendenti dai microtubuli, il rimodellamento del citoscheletro e la progressione del ciclo cellulare in sistemi cellulari umani.
α3d Tubulin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TUBA3D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TUBA3D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TUBA3D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TUBA3D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.