α3d Tubulin Double Nickase Plasmid (h): sc-400024-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das α3d Tubulin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- α3d Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h) und α3d Tubulin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TUBA3D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
α3d Tubulin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400024-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
α3d Tubulin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400024-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUBA3D kodiert α3d-Tubulin, eine strukturelle Untereinheit der Mikrotubuli, die als Partner von β‑Tubulin fungiert und die Organisation des Zytoskeletts, den intrazellulären Transport sowie den Aufbau des mitotischen Spindelapparats unterstützt. Als Bestandteil des Tubulin-Heterodimer-Pools trägt α3d-Tubulin zur dynamischen Instabilität der Mikrotubuli bei, die Zellteilung, Polarität und Vesikeltransport zugrunde liegt, und steht in Wechselwirkung mit Signalwegen, die von mikrotubuli-assoziierten Proteinen sowie Motorprotein-Komplexen wie Kinesinen und Dynein gesteuert werden. Störungen in der Expression von Tubulin-Isotypen und in der Mikrotubuli-Regulation sind breit relevant für Aneuploidie, chromosomale Instabilität und veränderte Zellmotilität—Prozesse, die häufig in der Krebsbiologie und in neuroentwicklungsbezogenen Kontexten untersucht werden. TUBA3D ist daher ein nützliches Ziel, um mikrotubuliabhängige Phänotypen, Zytoskelett-Remodellierung und die Zellzyklusprogression in menschlichen Zellsystemen zu analysieren.
α3d Tubulin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TUBA3D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TUBA3D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TUBA3D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TUBA3D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.