α3C Tubulin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400020-ACT

TUBA3C codifica per la tubulina α3C umana, un’isotipo “core” di α-tubulina che polimerizza con la β-tubulina per formare microtubuli essenziali per l’organizzazione del citoscheletro, l’assemblaggio del fuso mitotico e il trasporto intracellulare. La dinamica dei microtubuli coordina la progressione del ciclo cellulare, la funzione del centrosoma e il traffico polarizzato, influenzando processi quali la crescita dei neuriti e la migrazione cellulare. Alterazioni dell’espressione della tubulina o dell’omeostasi dei microtubuli sono associate a instabilità cromosomica e a una sensibilità modificata agli agenti che bersagliano i microtubuli, rendendo gli isotipi della tubulina rilevanti negli studi su fenotipi proliferativi e neurobiologici. In quanto componente strutturale del pool di tubulina, la tubulina α3C rappresenta un nodo maneggevole per analizzare la segnalazione e le risposte allo stress dipendenti dal citoscheletro.

α3C Tubulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TUBA3C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

α3C Tubulin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TUBA3C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TUBA3C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di α3C Tubulin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TUBA3C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da α3C Tubulin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via α3C Tubulin nelle cellule tumorali con espressione di TUBA3C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.