α3C Tubulin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400020-ACT

TUBA3C kodiert das humane α3C‑Tubulin, eine zentrale α‑Tubulin‑Isoform, die zusammen mit β‑Tubulin zu Mikrotubuli polymerisiert, die für die Organisation des Zytoskeletts, den Aufbau der mitotischen Spindel und den intrazellulären Transport essenziell sind. Die Dynamik der Mikrotubuli koordiniert den Verlauf des Zellzyklus, die Funktion des Zentrosoms und den polarisierten Transport und beeinflusst damit Prozesse wie Neuritenauswachsen und Zellmigration. Störungen der Tubulinexpression oder der Mikrotubuli‑Homöostase sind mit chromosomaler Instabilität und einer veränderten Empfindlichkeit gegenüber mikrotubuli‑gerichteten Wirkstoffen verbunden, wodurch Tubulin‑Isoformen für Studien zu proliferativen und neurobiologischen Phänotypen relevant sind. Als struktureller Bestandteil des Tubulinpools bietet α3C‑Tubulin einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zytoskelettabhängige Signalwege und Stressantworten zu untersuchen.

α3C Tubulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TUBA3C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

α3C Tubulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TUBA3C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TUBA3C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen α3C Tubulin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TUBA3C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von α3C Tubulin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des α3C Tubulin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TUBA3C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.